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蛋白质SDS-PAGE电泳实验常见问题及改进措施-北京六一DYCZ-24DN电泳槽,DYY-6D电源

[导读]SDS-PAGE电泳是检测蛋白质纯度和评估蛋白质分子量的常用方法, 也是一项极其重要的生物化学实验技术,SDS-PAGE电泳实验过程中凝胶渗漏、凝固时间不易把握等问题, 以及染色、脱色耗时长且需使用甲醇等缺点, 提出巧用白吸头解决漏胶问题, 设立对照判断凝胶是否凝固, 用考马斯亮蓝G250代替

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (ployacrylamide gel electrophoresis, PAGE) 是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳技术, 常用作蛋白质分离鉴定。聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺单体 (Arc) 和交联剂甲叉双丙烯酰胺 (Bis) 在催化剂过硫酸铵 (APS) 和加速剂四甲基乙二胺 (TEMED) 的作用下聚合而成。十二烷基硫酸钠 (Sodium dodecyl sulfate, SDS) 是一种阴离子蛋白质变性剂, 它能破坏蛋白质分子内和分子间的氢键, 并且覆盖在其表面, 各亚基在从电场负极向正极端泳动时, 其迁移率主要取决于分子量的大小。SDS-PAGE可根据蛋白质的分子量大小, 配制不同浓度的凝胶, 从而调控凝胶的孔径大小, 可使不同分子量的蛋白质得以分离。SDS-PAGE具有设备相对便宜、样品用量少、操作相对简便和重复性好等优点;而且该技术分辨率高, 在很多情况下, 优于常用的层析、超速离心及琼脂糖凝胶电泳;此外, 该技术不仅能分离蛋白质, 还能分离核酸等。总之, SDS-PAGE技术广泛地应用于生物大分子的分离、鉴定、检测、定性和定量分析等领域, 在生化技术中占有十分重要的地位, 因此许多高校生物类相关专业均开设SDS-PAGE电泳实验。SDS-PAGE电泳是一项极其重要的生物化学实验技术, 因为它是检测蛋白质纯度和评估蛋白质分子量的常用方法,SDS-PAGE凝胶的凝固时间受多方面因素影响, 如气温、凝胶的浓度、制胶试剂的纯度和玻璃板间夹缝的厚薄等。一般来说, 气温低、凝胶浓度高、试剂纯度高和玻璃板间夹缝薄时, 凝胶速度更快。SDS-PAGE的凝胶分为下层的分离胶和上层的浓缩胶两层, 分离胶凝固后再制备浓缩胶, 因而制胶步骤时间较长,传统的染色与脱色, 一般先用考马斯亮蓝R-250染色液 (冰醋酸-甲醇体系) 对电泳后的SDS-PAGE凝胶染色, 再用常规脱色液 (冰醋酸-甲醇体系) 脱色, 不仅时间长, 甲醇还有一定毒性。有研究表明, 微波炉应用于SDS-PAGE凝胶的染色和脱色可以节约一些时间。

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