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美国精骐-猕猴桃表面筛选出优良的野生酵母

[导读]为筛选猕猴桃酒专用酵母,通过酵母菌的分离、显微镜观察和杜氏管产气试验、耐受试验、发酵力测定试验以及酵母凝集性试验,筛选出一株性能优良的菌株命名为 L36。实验表明,该菌能够耐受的酒精度为14%,可耐受的二氧化硫质量浓度为 250 mg/kg,主发酵 CO2 失重量为 15.04 g,凝集性强。

猕猴桃(Actinidia chinensis Planch)原产于中国,又称阳桃、麻藤果、羊桃、藤梨等,属猕猴桃科(Actin-idiaceae)猕猴桃属(Actinidia)植物果实(袁琳等, 2017)。猕猴桃营养丰富,含有氨基酸、维生素、生育酚、有机酸以及人体所需的一些微量元素等(Bursal and Gulcin, 2011),被称为“水果之王”。猕猴桃还具有医疗健价值,如治疗烧伤(Hafezi et al., 2010)、降低血脂血压、预防癌症等。近几年,随着中国猕猴桃产业迅速发展,猕猴桃鲜销压力已经显现,并且中国还有大量的野生猕猴桃,在鲜销上不具优势,因此开展猕猴桃加工的研究具有重要意义(袁琳等, 2017)。果酒酿造是猕猴桃精深加工的方式之一,但猕猴桃酿酒研究薄弱,缺乏专用菌种是关键问题之一。生产上,一般都是采用葡萄酒活性干酵母酿造猕猴桃酒,但存在口感及稳定性较差、果香不突出、VC 保留低、酸度高等问题本研究拟以红阳和秦美猕猴桃为原料,通过对其表面的野生酵母菌进行分离、筛选和鉴定,获得适合猕猴桃酒酿造的专用优良酵母。

材料与方法
试验材料
实验原料与试剂
红阳猕猴桃、秦美猕猴桃购自雅安农贸市场。酵母粉、蛋白胨、琼脂为国产生化试剂,PCR 扩增试剂盒购自生工生物工程上海股份有限公司,引物ITS1/ITS4 购自 Tsingke,其它试剂均为国产分析纯。
培养基
YEPD 培养基:酵母粉 10 g、蛋白胨 20 g、葡萄糖20 g、蒸馏水 1 000 mL、pH 值 6.0、115℃灭菌 20 min。猕猴桃清汁培养基:猕猴桃破碎后榨汁,加入0.05g/L的果胶酶,0.7 g/L 的硅藻土 40℃恒温保护 4.5 h,虹吸上清液得清汁,加入 SO2 并调整其浓度为 80 mg/L,然后加入蔗糖,调整猕猴桃清汁糖度为 20 Brix,置于 4℃冰箱备用。富集培养基:葡萄糖 5%、KH2PO4 0.25%、尿素0.1%、酵母膏 0.05%、MgSO4 0.1%、Fe (SO4)3 0.01%、孟加拉红(1%的水溶液) 0.023%,121℃高压灭菌 15 min。PDA 固体培养基(含氯霉素),购自北京奥博星生物技术有限责任公司。
主要仪器设备
气浴恒温振荡器(IS-RSD3型),美国精骐有限公司;电热恒温培养箱(HDP-9082 型),上海一恒科学仪器有限公司;生物安全柜(HR40-IIA2)南京温诺仪器设备有限公司;分析天平(京制 00000249 号),北京赛多利斯仪器系统有限公司;电热恒温水浴锅(DZKW-D-4),北京市永光明医疗仪器厂;CX21 双目光源生物显微镜,奥林巴斯有限公司;离心机(LegendMicro17),上海珂淮仪器有限公司。

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