经过风菌实验各种样品试剂的体积都有一定程度的接失不同品牌的灭菌设备试的损失星不同,不同盛滚容替志剂拥失量存在差异，微生犒检则前的灭营实脸应该灯灭营设备和容器对样羯品钻徜投先星的影帅进行验证确保脉流在灭酿完银旅后达到最适的体积和浓度。

灭菌是微生物实验最基础、最重要的一个环节,无菌操作畏穿于微生物实验的始终。在各种灭菌方法中,压力蒸汽灭菌是使用最广泛的一种1.-1，稳生物检测实验中往往需预先定量配湖好各种试洲培养基、生理盐水等)进行灭菌操作后再进行培养等后续工作。与灭菌后再进行分装相比这种灭菌方式可以减轻工作量同时避兔分装对溶滚造成二次污染习，然而在实际摆作中由于灭萤设备和容器造戏样品试刻质昼或体积的变化可能影响后续检测实验结果的准确性。在菌落总数检测中由稀释液误差带来的不确定度是影响汉星结果准确性的主要因素之一」，以副溶血性弧菌为例队)它怍为一种嗜益性细菌对益滚度环项要求严格,3%氯化钠碱性缓冲蛋白陈水作为测定副溶性弧菌的关键试剂,其浓度的改变直接影响实验的成功与否51。

为考察灭营设备和盛装容器对样品试剂损大量的影响实验选取了常用于食品中菌落总数检测的PCA营荞琼脂培养基、磷酸缓中疫和生理盐水(，及用于食品中副溶血性弧菌检测的3%氯化钠碱性缓冲蛋白陈水,使用3个不同品牌的灭菌锅在4种不同盛装容器进行灭菌实验。获取各种实验条件下试剂损失的情况,为修正样品试剂加入量提供依据。

1材料和方法

1.1主要试剂

PCA营养琼脂培养基购自广东环凯微生物科技有限公司3%氯化钠灞性缓冲蛋白肤水、磷酸缓冲疫干粉购自北京陆桥技术股份有限公司(0.85%生理盐水(自即)纯水(实验室用水;枯草芽他杆菌生物指示剂购自广州康龙生物有限公司。

1.2主要仪器

LDZX型立式压力蒸汽灭菌锅Ⅰ号锅上海申安医疗器械厂生产高压灭菌锅GR6DS Ⅱ号锅致檄(厦门伙强有限公司生产不锈钢立式压力蒸汽灭菌器YM6OZ亚号锅上海三申医疗器协有限公司生产电子天平梅特勒250 m L聚丙烯耐高温广口塑料试剂瓶;250 m L锥形瓶;封口膜耐高压橡皮筋,15 mm×100 mm普通试管;硅胶塞;试管盖帽:250 m L星筒;自动分液器。

1.3方法

PCA营养琼脂培养基、3%氯化钠碱性缓冲蛋白陈水、磷酸缓冲液按商品说明书加水溶解配制)将推形瓶、塑料试剂振、盖帽试管和硅胶塞试管干燥标记后称重并记录空瓶质量并加入相应量的试机称重记录为灭菌前质量,各容器的试剂添加量。

平均分成3组分别置于3种灭菌锅中同时加入枯草芽他杆菌生物指示剂于124C,15 min高压灭菌。灭菌完成后干燥冷却至室温后称重记录为灭菌后质量。每种高压锅重复10.实验结果取10次平行的算术平均值。

1.4损失率的计算

2结果与讨论

经灭菌后,生物指示剂中的孢子均被完全杀灭7l,三种灭菌锅的灭菌效果均为满意,灭菌性能正常。用锥形瓶瓶盛装的PCA营养琼脂培养基、3%氯化钠碱性缓冲蛋白陈水、磷酸缓冲液和生理盐水在三种灭菌锅中的损失。

Ⅱ号锅试剂的损失率明显要比Ⅰ号锅和Ⅲ号锅都小,I号锅和Ⅲ号锅每一种溶液的损失率都在5%以上;添加了琼脂的试剂经灭菌后比没有添加琼脂的试剂损失的成分更少。

用塑料试剂瓶盛装的灭菌溶液损失率。

通过对比1和2可以看到,在同样的灭菌环境中塑料试剂瓶要比锥形瓶更有效地防止试剂的损失,低溶度液体的损失率要比高浓度液体的损失率大。

采用不同的试首塞经灭菌后试管内词剂的变化情况见表4使用试管盖帽的生理盐水要比使用硅胶塞的生理盐水损失得少但是差异不大损失率都在5%以内两种加盖方式的试管都比使用锥形瓶和塑料试剂瓶的损失率要低。

在食品安全国家标准中POA营养琼脂培养基、磷酸缓钟液和生理盐水常用于食品中菌落总数的测定25 mL体酸缓中液、225 m L生理盐水和9 m L生理盐水是广泛使用的样品稀释液这也要求其用量的准确性,尤其是在对处于临界值的样品进行菌落总数的测定时如果稀释液的实际用量是偏低的话则会造成结果偏高容易误判。3%氯化的碱性缓冲蛋白脉水用于副溶血性弧菌的定性和定星金验而最洛血性菌是—种对盐敏感的食源性致病截在含盐量.5%-8%的环境中方可生长在含盐量2%~4%中生长迅速”。按商品说明书进行配词的3%氯化的碱住缓冲蛋白肪水经高压灭菌后水分有一定的损失造诚复化钠液渡偏高,使得副溶血性弧菌生长变缓慢或不生长,从而影响了结果的准确性。

3结论

试剂经高压灭菌锅灭菌后都会有一定程度的质量损失每种试剂在不同灭菌锅中的提失量也不同同一试剂用不同容器盛装在同一灭菌锅中的质星损失也不同因此,在实验开始前实验室应协对这些可能影响实验结果的因素进行评估和验证，对用量要求相对严格的培养基可在灭菌前增加相应的量以抵消灭菌过程中的损夫而对浓度要求相对严格的培养基则应在配动制时增加相应的水分确保灭营完成后神养基的浓度在合理范围内。