微生物培养的污染因素

 风速与风向

一般培养箱在箱体内配备了风道和循环系统，合适的风速与风向利于培养箱温度的均一性，有利于培养物的正常生长。但是，当风速过大时，易造成培养基干裂，培养结果不准确。此外，GB4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》中要求培养皿正置培养，而GB 4789.15—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》中要求培养皿倒置培养，经过多次空白培养皿验证发现，同样的风速，当培养箱运行时的风向与培养皿盖的朝向相对时，空气中的灰尘、杂菌等容易对培养物造成污染，因此，培养箱运行时的风向最好与培养皿盖的朝向一致。

 培养皿的密闭性

培养皿由平面圆盘底和盖组成，材质主要为塑料和玻璃。微生物实验室内所用的培养皿，通常直径90 mm，采用顶盖封装，平皿的底和盖之间有一定空间，且两者并非完全密闭，能满足需氧型微生物对氧气的需求，但是也增加了污染的可能性。尤其是不同厂家的培养皿由于成型工艺和参数不同，平皿的底和盖之间的间隙也不同，经试验验证，在同样的培养条件下，间隙大的比间隙小的污染概率大，污染程度深。此外平皿的底和盖之间间隙不同还会使培养皿内培养基水分蒸发多少不一，造成培养结果数据的不一致。

培养箱内湿度

水分是微生物生存和繁殖的主要条件之一。微生物细胞中含70%～85%的水分，而且必须在有水分的环境中生活。湿度对微生物生长的影响，是通过影响微生物细胞内水分活度（AW）进而影响新陈代谢来影响其生长状况。

微生物生长有一个最适AW，当AW降低时微生物生长减慢，降低到某一水平微生物停止生长。微生物发育时的最低AW是变化的，各种霉腐微生物生长繁殖的最适湿度，因菌属不同而略有差异。一般来讲，细菌最敏感，其次是酵母和霉菌，即细菌生长所需的AW比酵母高，而酵母生长所需AW比霉菌高。一般情况下AW<0.90时，细菌不能生长，AW<0.87时大多数酵母受到抑制，AW<0.80时，大多数霉菌不能生长。降低湿度将使AW降低并减慢微生物的生长速度。培养箱内湿度太高或太低容易造成培养基与培养箱之间湿度的失衡，如培养箱内湿度太高容易在培养皿上形成水珠，滴入培养基中使细菌蔓延生长而影响试验结果；若培养箱内湿度太低则会造成培养基中水分散失，影响培养基上细菌生长。由此可见，适宜的温度、湿度，有利于细菌或霉菌酵母的生长。

培养箱内湿度来源有：一是源于培养基中水分的散失；二是源于人工或培养箱湿度自动控制系统对湿度的调控；三是源于培养箱放置环境，而培养箱放置环境一般为洁净干燥通风良好的自然环境。

培养物溢洒

培养物溢洒指包含生物危险物质的液体或者固态物质意外地与包装材料分离的过程，一旦在培养箱中发生有生物学危害的物品溢出时，由于溢出物会有微生物生长繁殖，应立即对培养箱进行清理，要使用有效的消毒剂对培养箱的内壁及所有接触溢出物品的材料进行消毒或高压灭菌。如果培养过霉菌或其他致病菌的培养物发生溢洒未及时处理，再用来培养其他微生物时，就会因残留的霉菌或致病菌造成培养箱污染，进而造成交叉污染，影响试验结果的准确性。因此，在日常试验中应尽量避免培养物溢洒，如果发生培养物溢洒，应立即由专人对培养箱进行清理并消毒。如果溢洒物中含有破碎的玻璃，不得直接用手取走或弃置，应用硬纸板和镊子处理，将处理物置于耐扎的废弃物容器中，然后用75%酒精擦拭仪器设备表面2遍，作用3 min，最后对清洁工具进行消毒。

自然环境污染

培养箱应放置在洁净、干燥、通风良好的自然环境中。若环境中空气洁净度太差容易滋生细菌、真菌、病毒，通过平皿底和盖之间的间隙污染培养基，进而影响培养结果数据的准确性。