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影响凝胶聚合的因素

[导读]聚丙烯酰胺凝胶分为非变性凝胶和变性凝胶 所谓非变性凝胶,即在凝胶中不加SDS和巯基乙醇等变性剂,这种凝胶中,蛋白质仍保持活性,其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

1) Acr及Bis的纯度:应选用分析纯的Acr及Bis,如试剂不纯,含有杂质或丙烯酸时,则凝胶聚合不均一,或聚合时间延长甚至不聚合, 因而需进一步纯化。 Acr和Bis贮液的pH值为4.9-5.2,当pH值的改变大于0.4pH单位则不能使用,因在偏酸或偏碱的环境中,它们可不断水解放出丙烯酸和NH4+ 而引起pH值改变,从而影响凝胶聚合。 因此,配制的Acr和Bis贮液应置棕色瓶中,4℃贮存 ,存放期一般不超过1-2个月为宜。2)AP、核黄素、TEMED:增加AP和TEMED可加快聚合速率,但过量的AP和TEMED会引起电泳时烧胶和谱带变形。应选择合适的配方使聚合在40-60min内完成。3)pH:碱性条件下聚合快,但碱性过强时胶硬而脆,需高pH时应减少AP和TEMED用量,制酸性胶可加AgNO3等促进聚合。4)温度:温度高聚合快,但高浓度凝胶聚合时易产生小气泡,低温(5℃)聚合凝胶会变得脆而混浊,一般25-35℃聚合较好。5)氧分子:氧分子阻碍凝胶聚合,故不含SDS的凝胶更好先抽真空脱气,再加引发剂。

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