PCR电泳之琼脂糖凝胶电泳实验-琼脂糖核酸电泳步骤
2022-05-06 13:21:41
[导读]聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外合成双链DNA的一种方法，其原理类似于天然DNA的复制过程，其特异性主要依赖于与其目的片段两端互补的特异引物和高特异性的酶。典型的PCR反应有三个步骤：变性，退火，延伸，经过多次循环反应，获得目的片段。
- 将电泳所用器具蒸馏水洗净，架好梳子
- 根据要分离的DNA片段大小制备合适浓度的琼脂糖凝胶，准确称取一定的琼脂糖加入到锥形瓶中，加入30ml左右的电泳缓冲液（TAE或TBE）
- 在微波炉中加热融化后冷却至40℃左右，充分混匀后倒入电泳槽中
- 室温下凝固40分钟左右，小心拔出梳子，将凝胶放置电泳槽中准备点样
- 在电泳槽中加入电泳缓冲液，漫过凝胶表面即可，点样孔内不要有气泡
- 样品点样前准备好，（在八连管中）加入5ul样品，1ul的6xLoding buffer和1ul的染料混合，用抢将混合后的样品缓缓注入到点样孔中，注意不要串孔
- 按照正负极（红正黑负），接通电源，电压40-60V，时间30-40min，可根据溴酚蓝的位置判断是否终止电泳
- 电泳结束，关闭电源，凝胶成像观察，并对比marker确定片段大小
